TSKgel 高效篩選抗體ADCC活性色譜柱

TSKgel 高效篩選抗體ADCC活性色譜柱 在單克隆抗體藥物的初期研發階段中，通過對細胞株實施篩選，選出能產生滴度較高、ADCC活性較高的細胞株。此時常會用到的幾種評估方法是，通過生物檢定法測定ADCC活性；通過表面等離子共振法（SPR）測定人體IgG受體（FcγⅢa等）的親和力；通過LC/MS分析抗體酶切下來的糖鏈結構等。但這些方法都需要花費大量的時間和人力。

能夠把這些復雜的評估分析法由繁化簡，并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。

TSKgel 高效篩選抗體ADCC活性色譜柱使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以直接分離抗體，無需對細胞培養液進行前處理。抗體主要可以分離出3個洗脫峰。已有研究表明，抗體糖鏈末端的半乳糖數量越多，在此色譜柱中的保留能力越強，而保留能力越強的洗脫峰，其ADCC活性就越高。

細胞培養液中單克隆抗體的分離

TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以用來測定和監控細胞培養時抗體糖鏈的性狀變化。取不同培養天數的細胞培養液，使用Protein A填料對抗體樣品粗純后，再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱分析的結果如圖所示。

抗體細胞培養天數和產生抗體的變化

隨著培養天數的延長，抗體的3個洗脫峰會向前側的洗脫峰位移。雖然延長了細胞培養天數，抗體的絕對產量增加，但是由于受到細胞外糖鏈修飾酶的影響，在色譜柱中的保留能力較高的抗體（多糖的末端半乳糖數量較多的抗體）的洗脫峰反而減少了。因此，可以推定產生的抗體的ADCC活性已經降低。

TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途

①確認不同細胞株 (CHO細胞、HEK細胞等) 中抗體的性狀變化。

②確認多個細胞株篩選時抗體的性狀變化。

③確認當改變細胞培養基添加劑時抗體的性狀變化

④細胞培養過程中隨培養天數的變化導致抗體性狀變化的確認。

⑤細胞培養規模放大 (更改培養方法) 時，確認抗體是否發生性狀變化。