應(yīng)用SEC柱G4000SWXl色譜柱 口蹄疫(Foot-and-mouthdisease，FMD)是傳染性的家畜疫病之一。目前，我國(guó)對(duì)口蹄疫采取以滅活疫苗免疫為主的防控策略，使用的滅活疫苗以雙相油乳劑疫苗為主，疫苗的質(zhì)量對(duì)于口蹄疫的防控關(guān)重要^[1-2]。疫苗對(duì)動(dòng)物的保護(hù)效果主要取決于兩個(gè)方面，一是疫苗毒株與流行毒株的相似程度，二是疫苗中抗原的含量^[3]。使用體積排阻色譜法（G4000SWxl色譜柱）對(duì)滅活的口蹄疫病毒液中的 146S 抗原進(jìn)行檢測(cè)，該技術(shù)在疫苗生產(chǎn)工藝研究和質(zhì)量控制中均具有應(yīng)用前景。

色譜條件

應(yīng)用SEC柱G4000SWXl色譜柱(7.8 mm×30 cm) 色譜柱 (TOSOH)、TSKgel guard column SW_XL(6.0mm×4cm)保護(hù)柱(TOSOH)；流動(dòng)相：pH7.2的 50 mmol/L 磷酸緩沖液，含 0.1 mol/L Na₂SO₄； 紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)：259 nm；流速：0.6 mL/min。將 146S 純化樣品色譜檢測(cè)結(jié)果作圖，經(jīng)線性回歸處理，得到146S的回歸方程為：Y=45216X–78 422 (R²=0.996， n=10)，結(jié)果表明， 146S 在0.56–67.42 µg/mL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，當(dāng)濃度為 0.56 µg/mL 時(shí)，S/N=14.62，滿足定量限要求。146S 抗原保留時(shí)間在 13–14 min 。

耐受性實(shí)驗(yàn)

通過(guò)改變流動(dòng)相pH值和環(huán)境溫度，考察方法耐受性。TSKgel G4000SWxl色譜柱pH適用范圍在2.5-7.5，且應(yīng)置于4-30°C。維持146S抗原穩(wěn)定性的適pH值為7.8。調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH范圍在6.9-7.5之間。146S抗原色譜峰保留時(shí)間和峰形*，考慮到色譜柱耐受性，選用該流動(dòng)相未經(jīng)過(guò)調(diào)節(jié)的pH值7.2-7.4。為防止146S降解，需注意實(shí)驗(yàn)室溫度不應(yīng)過(guò)高，且儀器樣品盤(pán)英設(shè)定低溫進(jìn)樣。