應用SEC柱G4000SWXl色譜柱

應用SEC柱G4000SWXl色譜柱 口蹄疫(Foot-and-mouthdisease，FMD)是傳染性的家畜疫病之一。目前，我國對口蹄疫采取以滅活疫苗免疫為主的防控策略，使用的滅活疫苗以雙相油乳劑疫苗為主，疫苗的質量對于口蹄疫的防控關重要^[1-2]。疫苗對動物的保護效果主要取決于兩個方面，一是疫苗毒株與流行毒株的相似程度，二是疫苗中抗原的含量^[3]。使用體積排阻色譜法（G4000SWxl色譜柱）對滅活的口蹄疫病毒液中的 146S 抗原進行檢測，該技術在疫苗生產工藝研究和質量控制中均具有應用前景。

色譜條件

應用SEC柱G4000SWXl色譜柱(7.8 mm×30 cm) 色譜柱 (TOSOH)、TSKgel guard column SW_XL(6.0mm×4cm)保護柱(TOSOH)；流動相：pH7.2的 50 mmol/L 磷酸緩沖液，含 0.1 mol/L Na₂SO₄； 紫外檢測器檢測波長：259 nm；流速：0.6 mL/min。將 146S 純化樣品色譜檢測結果作圖，經線性回歸處理，得到146S的回歸方程為：Y=45216X–78 422 (R²=0.996， n=10)，結果表明， 146S 在0.56–67.42 µg/mL 范圍內呈良好的線性關系，當濃度為 0.56 µg/mL 時，S/N=14.62，滿足定量限要求。146S 抗原保留時間在 13–14 min 。

耐受性實驗

通過改變流動相pH值和環境溫度，考察方法耐受性。TSKgel G4000SWxl色譜柱pH適用范圍在2.5-7.5，且應置于4-30°C。維持146S抗原穩定性的適pH值為7.8。調節流動相pH范圍在6.9-7.5之間。146S抗原色譜峰保留時間和峰形*，考慮到色譜柱耐受性，選用該流動相未經過調節的pH值7.2-7.4。為防止146S降解，需注意實驗室溫度不應過高，且儀器樣品盤英設定低溫進樣。