選擇合適的反相c18色譜柱是液相色譜分析中至關(guān)重要的一步，它廣泛應(yīng)用于各種化合物的分離，尤其適用于非極性或低極性化合物的分析。其選擇不僅關(guān)系到分離效果，還直接影響到分析的準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性和實(shí)驗(yàn)效率。以下是選擇合適反相c18色譜柱時(shí)需要考慮的幾個(gè)關(guān)鍵因素。

　　1、柱長(zhǎng)與內(nèi)徑

　　柱長(zhǎng)和內(nèi)徑是影響色譜分離的兩個(gè)重要參數(shù)。柱長(zhǎng)決定了分離的效率，通常柱長(zhǎng)越長(zhǎng)，分離效果越好，但樣品分析時(shí)間會(huì)相應(yīng)增加。柱內(nèi)徑則影響樣品的加載量和流速，內(nèi)徑越大，樣品的加載量越多，但對(duì)于高分辨率分離來說，較小內(nèi)徑的柱子可能更適合。

　　2、顆粒大小

　　色譜柱中填充物顆粒的大小對(duì)分離性能和分析時(shí)間有重要影響。顆粒越小，分離效率越高，但流動(dòng)相的壓降也會(huì)相應(yīng)增大。對(duì)于需要高分辨率的分析，可以選擇較小顆粒的色譜柱，例如3μm顆粒的色譜柱適合分析小分子化合物或復(fù)雜樣品，而5μm顆粒的色譜柱適合較常規(guī)的分析需求。在選擇時(shí)需要權(quán)衡分辨率和分析速度之間的平衡。
 

　　3、表面修飾和鍵合度

　　反相c18色譜柱中的C18鍵合基團(tuán)是用于分離的主要活性基團(tuán)，不同的柱子其C18鍵合的方式和修飾程度可能不同，這直接影響分離的效果。高鍵合度的柱子通常能提供更好的耐用性和更高的分辨率。選擇時(shí)，應(yīng)該根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需求來決定是選擇常規(guī)的中鍵合度色譜柱，還是選擇高鍵合度或特殊表面修飾的色譜柱。

　　4、孔徑大小

　　色譜柱的孔徑直接影響到柱子的分離能力和樣品的加載量。孔徑較大的色譜柱能夠承載更大的樣品量，但分離效果可能較差。反之，孔徑較小的色譜柱雖然適合分析較小量的樣品，但能夠提供更高的分辨率。因此，選擇孔徑大小時(shí)，應(yīng)根據(jù)樣品的性質(zhì)以及所需的分離效果來進(jìn)行選擇。

　　5、流動(dòng)相和pH范圍

　　選擇還應(yīng)考慮所使用的流動(dòng)相的特性以及色譜柱的pH適應(yīng)范圍。不同的類型對(duì)酸堿性的耐受性不同，一些色譜柱可能對(duì)高pH或低pH不夠穩(wěn)定，因此需要特別注意。此外，流動(dòng)相的選擇也會(huì)影響分離效果，例如在使用有機(jī)溶劑時(shí)，可能更適合，而對(duì)于極性化合物的分離，可能需要考慮其他種類的色譜柱。

　　在選擇反相c18色譜柱時(shí)，應(yīng)綜合考慮柱長(zhǎng)、內(nèi)徑、顆粒大小、鍵合度、孔徑大小、流動(dòng)相適應(yīng)性、溫度穩(wěn)定性、選擇性及品牌質(zhì)量等因素。根據(jù)樣品的特性和實(shí)驗(yàn)的需求，選擇合適的色譜柱可以顯著提高分離效果和實(shí)驗(yàn)效率。